莫和国   严达尊   黄文东

中山市陈星海医院检验科 528415

　　人类红细胞中所含乳酸脱氢酶(LDH)的浓度大大高于血清中的LDH，标本溶血时血清中LDH活力会明显升高并干扰LDH的测定，所以以往LDH测定均严禁用溶血标本 Frank[1]报告不同程度溶血标本中酶(特别是LDH、AST) 活力增加的程度与溶血程度相一致。作者应用Hitachi-7020 全自动生化分析仪中血清信息功能[2]提供的溶血指数(H指数)来恒量溶血程度，并应用该份溶血标本的红细胞的溶血液中LDH活力来校正溶血标本血清中由于溶血而造成LDH活力增加的部分。从而得出临床工作中实际需测定的LDH活力，现介绍如下：

一、原理

某份溶血标本其红细胞溶解而造成血清中LDH活力增高的程度(LDH1)应与其溶血程度(用溶血指数H恒量)H1呈显著相关。取该份标本的红细胞用生理盐水洗涤后的溶血液测定LDH活力为LDH2，溶血指数为H2，而LDH2与H2也呈显著相关。LDH1和LDH2均由同一人近期的红细胞溶血而来，则LDH1和H1的比例关系应与LDH2与H2的比例关系一致的，即LDH1/H1=LDH1/H1。临床工作中可取该份标本的红细胞洗涤溶血后稀释成系列浓度，求出LDH2和H2的回归方程，代入H1可求出相当于LDH1的活力。也可简化为仅稀释至某一程度(H=H2)，然后根据计算式LDH1=H1×LDH2÷H2 (其中H1与H2越接近则误差越小)来求LDH1。测定溶血标本血清的总LDH活力(LDH3)，则实际所需的LDH活力(LDH4)可由计算式：LDH4=LDH3-LDH1=LDH3-H1×LDH2÷H2 来求出。

二、材料

   Hitachi-7020全自动生化分析仪    (日本日立公司生产)

   LDH-L法试剂盒                 (上海长征试剂公司生产)

三、实验与结果

1. 洗涤后红细胞的溶血液中LDH与H的关系

    取6份标本的红细胞用生理盐水洗涤后放入小铁棒在磁力搅拌器上搅拌，溶血后各自用生理盐水稀释成系列浓度的溶血液。分别在7020生化仪上测定LDH活力与H，以LDH活力为纵坐标，H为横坐标，计算各标本LDH与H的相关系数和回归方程为:

r=0.977  y= 1.8+0.891X  ；  r=0.941    y=3.1+0.845X  ；

r=0.978  y= 2.3+0.901X  ；  r=0.998    y=0.8+0.942X  ；

r=0.968  y=-3.5+0.865X  ；  r=0.984    y=2.5+0.921X  。

各份标本红细胞中LDH与H显著相关，但6份标本的回归方程两两作回归系数和截距的对比t检验后证明回归方程不能合并。

2. 生理盐水洗涤红细胞时对红细胞内LDH的影响

　　取3份标本的红细胞各1体积与2体积生理盐水混合放置5、10、30、60分钟后离心测上清液H和LDH活力(U/L)并测生理盐水空白H与LDH活力作对比，结果见附表：

3. 对照实验

    作者对23份抽血过程造成溶血(H>45)的标本，用本法校正后的结果与及时重抽血再测LDH的结果对比，经配对t检验  t=1.82  P>0.05，其结果无显著差异性。

　　附表       生理盐水对红细胞内LDH的影响

   \时间    5min       10min       30min    60min  

标本\      H   LDH   H   LDH     H   LDH   H   LDH 

    1      0    1      0         1    0    2    0    3  

    2      0    2      0         3    0    3    0    2  

    3      0    2      0         3    0    3    0    3  

生理盐水   0    0      0         1    0    0    0    1  

4. 回收实验

    取10份LDH活力39-981(U/L)，肉眼无溶血并已测其H的标本，加入小铁棒于磁力搅拌器上人为造成溶血，再以本法校正LDH，求出回收率为99.6%-103.1%，平均回收率为101.6%。

5. 同一份标本取不同红细胞的影响

    作回归实验用的10份标本吸取红细胞作校正管时，均取双份红细胞来做两份校正管，分别校正LDH，两组LDH活力进行配对t检验  t=2.01 P>0.05，两份红细胞作校正管时无差异性。

四、讨论

   由3.1中实验可见LDH活力与H呈显著相关，可用H恒量红细胞内LDH活力但由于不同人，不同时期其红细胞内所含LDH不等，其血红蛋白的量也不同，且回归方程对比后不能合并表明不同溶血标本同一溶血程度(H相等)时，LDH增加的活力不一致而3.5实验表明在同一份标本中任取一些红细胞来作校正管对校正结果并无影响。所以本法采用了标本自身的洗涤红细胞溶血后作校正管，而不能如文献[1][3]中仅以Hb 1g/L的溶血可使LDH活升高96U/L或257U/L来校正LDH活力。

由3.2实验可见，用生理盐水洗涤红细胞时，并不会对红细胞内LDH含量造成影响，一般洗涤2-3次即可，主要是为去除残余血清中的LDH。洗涤后的红细胞不可用蒸溜水来溶血或稀释，否则使LDH活性受抑制，这与文献[4]相符合，本法用搅拌法溶血和用生理盐水稀释，效果良好。

本法校正溶血标本中LDH活力对轻、中度溶血标本效果极好，避免了重抽血的麻烦。同时也解决了溶血性疾病的患者非红细胞溶血来源的LDH活力测定的困难。因重度溶血而超过测定线性范围的标本，用生理盐水稀释后测定可收到一定效果。但作者建议此类标本最好重抽血获得无溶血标本来测定，因为重度溶血标本可有大量其它干扰物出现影响测定。

 Hitachi-7020生化仪的血清信息功能，采用分光光度法直接测定标本Hb，并校正了混浊和黄疸的干扰来求得H指数，是一种较精确评价溶血程度的方法。在日立、岛津系列等进口自动生化仪上均配有此功能。

 溶血造成LDH的升高，以往无法排除这种干扰，本法采用测定红细胞内LDH活力通过LDH活力与H比例关系求出血清中因溶血造成的LDH升高部分，从而解决这一难题，经3.3实验中23例标本的对照实验和临床近70例标本的验证与患者临床表现相符，表明本法可用于临床检验。且对于有类似情况的AST、羟丁酸脱氢酶、钾离子均可用本法处理。