王若永

摘要：目的  探讨幽门螺旋杆菌（Hp）感染中各种抗体存在的临床意义。方法  利用蛋白芯片技术检测四组研究对象共160例（胃肠炎症46例、消化性溃疡36例、胃肠道肿瘤14例以及门诊体检者64例）血清Hp的五种抗体：CagA抗体、VacA抗体、Ure抗体、Hsp60抗体、RdxA抗体。结果  胃肠炎症组的五种抗体的阳性率分别为50.2%、26.1%、69.6%、19.6%和19.6%；而消化性溃疡组则分别为47.2%、22.2%、66.7%、19.4%、和16.7%；消化道肿瘤组分别为28.6%、28.6%、57.1%、42.9和21.4%；对照组分别为17.2%、29.7%、60.9%、12.5%和29.7%。结论  胃肠炎症组、消化性溃疡组和胃肠道肿瘤组的CagA抗体、VacA抗体、Hsp60抗体和RdxA抗体的阳性率与对照组比较具有显著性差异（P<0.01或P<0.05），而与对照组比较，Ure抗体阳性率则差异不显著（P>0.05），因此提示不同抗体的存在与各种消化道疾病的发生关系密切。

关键词：幽门螺旋杆菌；蛋白芯片；抗体。

using protein chips to detect Helicobacter pylori Antibodies in patients infected by H pylori

WANG Ruoyong, the third military medical university, LIN Yulong, department of clinical laboratory, the second affiliated hospital , the first military medical university

【Abstract】Objective To study the significance of Helicobacter pylori(Hp) Antibodies in patients infected by the Hp. Methods The technology of protein chip was used to detect 5 kinds of Hp antibodies(anti-CagA, anti-VacA, anti-UreA, anti-Hsp60 and anti-RdxA) in 160 patients and control group including 46 gastroenteritis , 36 peptic ulcer ,14 gastrointestinal tract carcinoma and 64 consecutive adult outpatients. Results The positive rate of the five antibodies in group gastroenteritis(G-G) were 50.2% , 26.1%, 69.6%, 19.6%, 19.6% respectively. In group peptic ulcer(G-U) and group gastrointestinal tract carcinoma(G-C) ,they were 47.2% , 22.2% , 66.7% , 19.4% , 16.7% and 28.6%, 28.6%, 57.1%, 42.9%, 21.4% respectively. And the positive rate in control group(G-C) were 17.2%, 29.7%, 60.9%, 12.5%, and 29.7% respectively. Conclusions   Comparing with G-C , there was gnificant difference of positive rate of  anti-CagA, anti-VacA, anti-Hsp60 and anti-RdxA in G-G, G-U, G-C (p<0.01 or p<0.05). No significant difference (p>0.05) of the Anti-UreA was observed. It suggested that the presence of different Hp antibodies in patients is high correlative to all sorts of gastrointestinal tract diseases.

【Key words】: Helicobacter pylori(Hp), protein chip, antibody.

    幽门螺旋杆菌（Helicobacter pylori, Hp）呈全球性分布，多数地区感染率在50%以上，我国是HP感染的高发区，感染率在50%~80%。目前WHO已将HP列为第一类致癌因子，由于HP菌株不同，其所含细胞毒素相关蛋白CagA、VacA及其它致病因子也不尽相同，因而临床表现也各异。本研究利用蛋白芯片技术检测了几类消化道疾病患者血清中HP的5种抗体，试图阐明它们与各类消化道疾病的关系。

材料与方法

1、血清标本：各种消化道疾病患者为珠江医院住院病人。其中胃肠炎症46例，年龄为23~65岁，平均年龄为37±6.4岁；消化性溃疡36例，年龄为21~61岁，平均年龄为32±4.3岁，、胃肠道肿瘤14例，年龄为29~71岁，平均年龄为38±6.9岁；另外64例对照为门诊体检者血清，年龄为20~62岁，平均年龄为29±4.9岁。

2、蛋白芯片与阅读仪：由深圳欣康基因数码科技有限公司提供。

3、检测：原理见下图，操作严格按说明书进行。

4、结果分析：检测结果使用Mara2.0软件进行分析判定。

5、统计分析：不同组别之间同一抗体阳性率的比较采用χ²检验

结     果

1、蛋白芯片检测图片：各组检测对象经蛋白芯片反应后，在生物芯片阅读仪扫描下，由该系统配备的Mara2.0软件进行分析。各种HP抗体的蛋白芯片反应示意图(略）。

2、HP各种抗体的检测结果：各组检测对象中不同抗体的阳性率有较大的差别，其中胃炎和消化性溃疡组CagA抗体的阳性率显著高于胃肠道肿瘤组和对照组（P<0.01或P<0.05），而各组之间VacA抗体和Ure抗体的阳性率差异不显著（P>0.05），另外，值得注意的是胃炎组、消化性溃疡组以及胃肠道肿瘤组的RdxA抗体的阳性率显著低于对照组（P<0.05）。具体结果见附表。

附表：不同组别Hp五种抗体的检测结果

注: ^▼表示与对照组比较P<0.01；^☆表示与对照组比较P<0.05。^★表示与对照组比较P>0.05。

                                     讨     论：

Hp是从慢性活动性胃炎患者的胃黏膜分离的一种革兰氏阴性杆菌，一般情况下定植于胃黏膜，可引起慢性胃炎、消化性胃溃疡等消化道疾病，并且是胃腺癌与胃淋巴瘤的诱发因素之一⁽¹⁾。近年来研究表明幽门Hp还是心血管疾病、糖尿病和某些皮肤疾病的致病因子²⁾。Hp在胃黏膜繁殖后，能产生丰富的尿素酶，有极强的分解尿素的作用，尿素分解后产生的氨对黏膜产生毒性作用，致使黏膜损伤，破坏胃黏膜。

Hp本身是一个复合抗原，所含有CagA、VacA、Ure、Hsp60和RdxA等抗原蛋白可以在不同阶段刺激机体免疫系统，产生各种针对不同抗原决定簇的抗体，在体液中组成了Hp抗体谱。不同的抗体成分或是揭示了Hp的致病特点或与Hp感染的预后及耐药密切相关⁽³⁾。Hp按临床可分为细胞毒素阳性（+）Hp和细胞毒素阴性（-）Hp两类。它们在胃和十二指肠疾病中造成的后果不一样，细胞毒素阴性（-）Hp不产生细胞毒素，它虽然能覆盖在部分胃黏膜上，并使人体产生相应的免疫应答（产生Hp抗体），但不能侵入胃上皮细胞，一般可长期无临床症状。相反地，感染细胞毒素阳性Hp后，由于细胞毒素的作用造成胃上皮细胞空泡、损伤、坏死及溃疡，因此感染此类HP与胃、十二指肠溃疡及胃部肿瘤可能有较密切的关系^（4）。国内的研究发现具有高毒力因子（CagA）的Hp是胃肠疾病病人感染的常见菌株^（5）；国外研究表明95%的十二指肠溃疡及75%的

胃溃疡病人感染细胞毒素阳性Hp，同时80%以上的胃癌病人也与此有关⁽⁶⁾。

本研究的结果表明，胃肠炎症组、消化性溃疡组和胃肠道肿瘤组的CagA抗体、VacA抗体、Hsp60抗体的阳性率显著高于对照组（P<0.01或P<0.05），提示它们在患者体内的存在与这些消化道疾病关系密切。然而其RdxA抗体的阳性率则显著低于对照组，由于含有RdxA蛋白的菌株多数对甲硝唑类药物敏感，因此分析其原因，可能三组消化道疾病患者在治疗过程中，Hp由于逃避药物攻击而发生基因变异，因而成为甲硝唑类药物耐药株。此外，有文献表明，H pylori外膜对甲硝唑结合作用降低与甲硝唑耐药性的产生有关^（7）。另外，各组消化道疾病患者的Ure抗体阳性率与对照组比较差异不显著（P>0.05），综合以上五种抗体的检测情况，提示健康人群与患有消化道疾病患者的Hp感染率相近，而在感染过程中可能由于各种因素如发生基因变异或机体免疫力下降使部分HP 具有致病力。

目前临床上应用Hp抗体检测的试剂盒均采用Hp菌体抽提物制备完成，在临床上Hp抗体的检测结果大多数为阳性，这样造成了临床医师的困惑和无所适从，因此对胃肠道疾病的诊断治疗仍主要依靠传统的胃镜及活检报告，由于许多患者并不能接受胃镜及活检的方法，且该方法检测的阳性率也受限。而利用蛋白芯片技术可以同时检测Hp的多种抗体，获得一个动态、连续的抗体谱，不仅能提高对Hp检测的敏感性、特异性，而且能够获得更多感染病原体以及疾病的相关信息，如有助于临床明确诊断、选择药物、判断预后和疗效跟踪，为临床的诊断和治疗提供帮助。

参考文献：

(1) 姚永莉，张万岱. 幽门螺杆菌致病因子研究进展.世界华人消化杂志2002;10(4):455-458 (2) Pakodi F, Abdel-Salam OM, Debreceni A, Mozsik G. Helicobacter pylori. One bacterium and a broad spectrum of human disease. An Overview J Physiol Paris. 2000;94:139-152

(3) Go M F, Graham D Y. How does Helicobacter pylori cause duodenal ulcer disease: the bug, the host, or both? J Gastroenternal Hepatol ,1994,9:8~14

(4) 赵志泉，张红杰. 具有cagA,vacA基因的幽门螺旋杆菌感染与胃、十二指肠疾病的关系。中华消化内镜杂志，1997，6：334~336

(5) 童明宏，孙晨光. 幽门螺杆菌感染及其毒力因子和胃十二指肠疾病关系的研究。上海医学检验杂志，2002; 18(2): 96~98

(6) Covacci A , Censini S ,Bugnoli M ,et al . Molecular characterization of the 128 K Da immunodominant antigen of Helicobacter pylori associated with cytotoxicity and duodenal ulcer. Proc Natl Acad Sci USA ,1993,90:5791~5795

(7) 胡伟玲, 戴 宁,朱永良. 幽门螺杆菌外膜和甲硝唑的结合与耐药性的关系. 世界华人消化杂志 2002;10(9):1054-1055